根据临床初步诊断及待检细菌的种类，可选用不同环境条件进行培养。常用的有需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法。为了提高检验的正确率，同一标本常同时采用两种或三种不同的培养法。
（一）需氧培养法
本法是临床细菌室最常用的培养方法，适于一般需氧和兼性厌氧菌的培养。将已接种好的平板、斜面和液体培养基等，置于35℃温箱中孵育18～24h，一般细菌可于培养基上生长，但有些难以生长的细菌需培养更长的时间才能生长。另外，有的细菌最适生长温度是28℃～30℃，如鼠疫耶尔森菌，甚至在4℃也能生长，如李斯特菌。
（二）二氧化碳培养法
有些细菌初次分离培养时须置5％～l0％C02环境才能生长良好，如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，牛布鲁菌等。常以下列方法供给C02。
1.二氧化碳培养箱：是一台特制的培养箱，既能调节C02的含量，又能调节所需的温度。C02从钢瓶通过培养箱的C02，运送管进入培养箱内，调节好所需C02，浓度自动控制器后，将接种好的培养基直接放入培养箱中培养即可。此法适于大型实验室应用。
2.烛缸法：将已接种好的培养基置干燥器内，并放入点燃的蜡烛。干燥器盖的边缘涂上凡士林，盖上盖子，烛光经几分钟后自行熄灭，此时干燥器内C02含量约占5％～l0％，然后将干燥器放入35℃温箱内培养。培养时间一般为18～24h，少数菌种需培养3～7天或更长。
3.化学法：按每升容积加入碳酸氢钠0.49和浓盐酸0.35ml的比例，分别置于容器内。将容器连同接种好的培养基都放人干燥器内，盖紧干燥器的盖子，倾斜容器使浓盐酸与碳酸氢钠接触生成C02。
（三）厌氧培养法
适用于专性厌氧菌和兼性厌氧菌的培养。常用的厌氧培养法有：①疱肉培养基法；②焦性没食子酸法；③厌氧罐法；④气袋法；⑤厌氧手套箱法。
