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  • 脊髓性肌萎缩症患者骨骼肌中运动神经元生存蛋白表达量可能与疾病的严重程度相关

    作者:佚名    文章来源:医学教育网    点击数:    更新时间:2010/3/6

      中国研究者制备运动神经元生存(SMN)蛋白多克隆抗体,探讨SMN蛋白在细胞内的定位及在脊髓性肌萎缩症(SMA)患者骨骼肌中的表达情况。研究者构建pET-28a(+)/SMN原核表达质粒,诱导表达SMN-His融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备SMN多克隆抗体。构建pcDNA3.1/myc-HisB-SMN真核表达质粒并转染中国仓鼠卵母(CHO)细胞。收集骨折患者以及I、Ⅱ、Ⅲ型SMA患者的骨骼肌组织各3份。分别采用免疫印迹及免疫荧光染色技术进行CHO细胞及骨骼肌组织的SMN蛋白表达研究。研究结果发现,成功制备了兔抗人全长SMN多克隆抗体,经鉴定其特异性及敏感性均较高。

      免疫荧光染色显示SMN蛋白在细胞质及细胞核中呈斑片状或颗粒状分布,以核周较为明显。免疫印迹结果显示骨折患者骨骼肌组织SMN与内参照磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)条带密度比值(SMN/GAPDH)平均为0.619,Ⅲ、Ⅱ型SMA患者SMN/GAPDH比值较低,均值分别为0.347和0.340,而Ⅰ型SMA患者骨骼肌中SMN/GAPDH比值显著降低,均值仅为0.079.由此,研究者得出结论,高质量的兔抗人全长SMN多克隆抗体的制备为SMA的蛋白功能及发病机制研究奠定了基础,SMA患者骨骼肌中SMN蛋白表达量可能与疾病的严重程度相关。

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