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贲门痉挛-放射诊断学 本病病因尚未完全明了,但因发现其食管下段肠肌丛(奥氏神经丛)的神经节细胞变性和数量减少,多认 |
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乙型肝炎病毒在HepG2细胞中的稳定复制及表达 |
作者:佚名 文章来源:医学教育网 点击数: 更新时间:2010/3/6 |
该项研究目的是建立HBVHepG2肝细胞株,使HBV能长期稳定地表达抗原并复制。
方法将含完整转录单位的1.2倍体HBVDNA经Sal1位点克隆入真核表达载体pREP10,构建的重组载体pREP—HBV以Lipofemamine2000转染HepG2细胞,250μg/ml.潮霉素筛选抗性细胞克隆。ELISA检测细胞上清液中的HBsAg和HBeAg.电子显微镜下观察细胞上清液HBV颗粒。制备HBV特异性探针,以Southern印迹法检测细胞株内HBV核心颗粒DNA.结果获得含1.2倍体HBVDNA的重组载体,即pREP—HBV,该重组载体转染HepG2细胞后,获得5株潮霉素抗性细胞RHBV1~RHBV5.均能表达HBsAg和HBeAg.Southern印迹结果显示各株细胞均可见明显的杂交拖带,即存在HBVDNA复制中间体。细胞培养上清液浓缩后在电子显微镜下可见成簇的、直径约42nm的HBV颗粒及直径为22~26nm的球形颗粒。
由此得出结论成功建立了HBV稳定复制及表达的HepG2细胞株,目前细胞已传代50次,每3天1次。
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