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Fn、TPO基因修饰对人骨髓间充质干细胞的影响 |
作者:佚名 文章来源:医学教育网 点击数: 更新时间:2010/3/6 |
该项研究目的是观察纤维连接蛋白(Fn)、血小板生成素(TPO)融合基因修饰对人骨髓间充质干细胞(MSC)的影响。
方法采用构建携带Fn—TPO融合基因的重组逆转录病毒载体,并以其对骨髓MSC进行基因修饰;观察Fn—TPO基因在骨髓MSC中的表达,以及基因修饰后骨髓MSC的体外增殖、黏附造血细胞和分泌TPO的能力;并将脐血CD34^+细胞接种到基因修饰后骨髓MSC形成的滋养层,培养7d观察修饰后骨髓MSC对造血细胞体外扩增和集落形成能力的影响。结果成功构建携带Fn—TPO基因的重组逆转录病毒载体且以该逆转录病毒载体对骨髓MSC进行体外基因修饰;Fn、TPO基因在骨髓MSC内能够正常转录;基因修饰后的骨髓MSC体外增殖能力[(6.92±0.77)×10^4/ml]与对照组[(7.18±0.89)×10^4/ml]比较差异无统计学意义(P〉0.05);基因修饰组和对照组黏附造血细胞能力分别为0.188±0.018和0.167±0.017(P〈0.01),分泌TPO能力分别为(7.46±0.59)ng/ml和(5.58±0.37)ng/ml(P〈0.01),细胞分泌TPO的能力不受培养时间的影响,但受细胞生长状态影响;2×10^4脐血CD34^+造血干/祖细胞经基因修饰后骨髓MSC联合必要细胞因子体外扩增7d,有核细胞数、CD34^+细胞比例、BFU—E、CFU—GM及CFU—GEMM分别为(29.9±2.7)×10^4、(33.3±2.8)%、109.3±4.1/1×10^4CD34^+细胞、163.7±7.1/1×10^4CD34^+细胞、13.3±1.5/1×10^4CD34^+细胞,较对照组明显增加(P〈0.01)。
因此得出结论Fn-TPO基因修饰能够增强骨髓MSC黏附造血细胞、分泌TPO及支持脐血CD34^+细胞扩增的能力。
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