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贲门痉挛-放射诊断学 本病病因尚未完全明了,但因发现其食管下段肠肌丛(奥氏神经丛)的神经节细胞变性和数量减少,多认 |
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以白细胞介素-2为免疫佐剂的幽门螺杆菌粘附素核酸疫苗制备及其免疫预防作用 |
作者:佚名 文章来源:医学教育网 点击数: 更新时间:2010/3/6 |
该项研究目的是构建含幽门螺杆菌(Hp)粘附素(HpaA)基因和白细胞介素(IL)-2的核酸疫苗,体外转染COS-7细胞,鉴定其表达蛋白的免疫原性和免疫保护作用。
方法采用应用聚合酶链反应(PCR)技术从Hp标准菌株CCUG17874基因组DNA扩增HpaA基因;从重组质粒pCIneo—IL-2扩增小鼠IL-2基因,并通过TA克隆分别克隆人pUCmT载体。检测HpaA及IL-2的核苷酸序列,酶切、连接反应将HpaA和IL-2同时克隆人真核表达载体pIRES,再经PCR法和酶切反应进行鉴定;通过脂质体法将重组载体pIRES-HpaA—IL-2转染COS-7细胞,SDS-PAGE及Western印迹法检测表达蛋白的免疫原性。重组载体转化减毒鼠伤寒沙门菌LB5000,抽提质粒,转化人SL7207,反复传代,鉴定重组核酸疫苗菌的稳定性。以该疫苗菌经口接种小鼠,4周后再用Hp攻击,鉴定感染状况。结果测序结果证实扩增的HpaA基因与HpHpaA序列一致,IL-2序列和小鼠IL-2序列一致。PCR和酶切鉴定结果证实,HpaA和IL-2基因克隆人载体pIRES,成功构建含HpaA和IL-2基因的核酸疫苗质粒pIRES-HpaA—IL-2,Western印迹法检测到相对分子质量分别为30000和14000的HpaA和IL-2蛋白条带。小鼠体内实验显示HpaA—IL-2及HpaA组分别有75.0%、58.4%获免疫保护,与PBS组差异有统计学意义(P〈0.01)。
因此成功构建了HpaA和IL-2的Hp减毒沙门核酸疫苗菌,其免疫原性和保护性均得到证实,免疫佐剂IL-2可提高免疫保护率。
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