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  • 分子生物学分型法

    作者:佚名    文章来源:医学教育网    点击数:    更新时间:2010-3-6

      又称DNA分型法:灵敏度高,陈旧微量标本可检测,克服CDC和MLC的不足,前景广阔。

      (一)聚合酶链反应与SSP分型法方法

      采用一系列设计的特异性引物,作HLA基因PCR扩增,一对特异性引物只能扩增出结构与其互补的基因片段,根据引物扩增结果,能确定检样的基因型。

      评价:只需作PCR扩增及PCR产物检测,快速简便

      (二)PCR-SS0分型法

      序列特异性寡核苷酸-聚合酶链反应(PCR-SSO)是PCR与杂交相结合的技术。关键:预先知道Ⅱ类基因的核苷酸序列,设计出恰当的探针。评价:需合成大量DNA探针,操作步骤多,适合大规模分型和配型。

      (三)RFLP与PCR-RFLP分型法

      限制性片段长度多态性(RFLP)分析,是最早建立的研究HLA多态性的DNA分型技术。

      方法:PCR扩增的基因片段→等位特异的内切酶消化→切成长度不一、数量不等的基因片段→电泳分离,根据一系列内切酶解格局可确定PCR扩增产物的基因型。

      关键:预知Ⅱ类基因的核苷酸序列,并据此找到合适的内切酶。

      评价:不需同位素,简便,适合小规模分型。

      (四)PCR-SSCP分型法

      单链构象特异性-聚合酶链反应(PCR-SSCP),是以待测基因PCR扩增为基础,对扩增的DNA单链进行多态性分析的HLA分型方法。该法简单、快速、精确,已初步应用于异基因骨髓移植的配型工作。

      (五)SBT分型法

      基于序列的HLA分型法,是一种通过对扩增后的HLA基因片段进行核酸序列测定,从而判断HLA型别的方法。

      方法:PCR扩增出的HLA基因片段纯化,自动测序仪测序。

      评价:直接、精确、价格昂贵,主要用于新等位基因的鉴定。

     

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