原题: [生物化学]双脱氧末端终止法测序体系与PCR反应体系的主要区别是前者含有:? 选项: A.模板 B.引物 C.DNA聚合酶 D.ddNTP E.缓冲液
答案: D 解析:
答复:本题选D。 一、双脱氧末端终止法测序体系 用一侧引物对PCR产物进行双脱氧末端终止法测序反应,用一个ddNTP参入反应,产生长短不一的单链DNA ,然后进行SSCP分析。可分别使用两侧的PCR引物,获得一端平齐的长度不等的DNA单链。DDF方法克服了SSCP分析时因DNA长度影响SSCP显示的困难,通过一种双脱氧核苷酸产生异质性的单链DNA,使其中长度合适的DNA片段显示SSCP改变。 二、PCR反应体系 标准的PCR反应体系: 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10~100pmol 模板DNA 0.1~2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
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