缩合反应。异烟肼的酰肼基可以和含羰基的试剂（如芳醛）发生缩合反应。异烟肼与香草醛反应，生成异烟腙，测定熔点供鉴别。

　　沉淀反应。异烟肼分子中的吡啶环具有碱性，可以和重金属盐类（如氯化汞、硫酸铜、碘化铋钾）乙基苦味酸形成沉淀。异烟肼和氯化汞可生成白色沉淀。和硫酸铜-枸橼酸试液反应，先产生绿色沉淀，加热，沉淀变为红棕色。

　　尼克刹米的鉴别：戊烯二醛反应。属吡啶环的开环反应。尼克刹米分子中的吡啶环与溴化氰反应，开环形成戊烯二醛的衍生物，再与苯胺缩合，形成黄色的希夫氏碱。［医学 教育网 搜集整理］

　　异烟肼也可发生戊烯二醛反应，但需先用高锰酸钾或溴水氧化为异烟酸，再与溴化氰作用。来源：考试学习网

　　与苯胺缩合形成黄色至棕黄色产物，与联苯胺紫外分光光度法形成淡红至红色产物。

　　水解反应。尼克刹米分子中的酰胺基在碱性条件下可水解，加氢氧化钠试液，加热，即有二乙胺臭味逸出，能使湿润的红色石蕊试纸变成蓝色。

　　沉淀反应。尼克刹米分子中的吡啶环也可以和重金属离子反应。尼克刹米和硫酸铜及硫氰酸铵作用，生成草绿色配位化合物的沉淀。

　　异烟肼中游离肼的检查：薄层色谱法。肼的检测限为0.1μg，控制限量为0.02%.

　　异烟肼的含量测定：异烟肼分子中的酰肼基具有还原性，可采用氧化还原滴定法测定其含量。溴酸钾法。甲基橙作指示剂，溴酸钾滴定止粉红色消失。每1ml的溴酸钾滴定液（0.1667mol/l）相当于3.429mg的C6H7N3O。

　　异烟肼的片剂、注射剂均采用溴酸钾法测定含量。

　　还可使用溴量法、剩余碘量法测定含量，也可用非水溶液滴定法。

　　尼克刹米含量测定：非水溶液滴定法。溶剂：冰醋酸，指示剂：结晶紫，滴定液：高氯酸。至溶液蓝绿色。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/l）相当于17.82mg的C10H14N2O。

　　紫外分光光度法。测定尼克刹米注射剂含量。注射剂的溶剂对非水溶液滴定法有干扰，所以采用本法。使用0.5%硫酸溶液溶解样品，是为了使药物呈离解状态，易溶于水。