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1、标本采集

肠道感染可采集粪便；肠外感染可根据临床感染情况采集标本，除血液标本外，均需作涂片染色检查。脓、痰、分泌物可直接涂片，革兰染色后镜检。尿液和其它液体先低速离心，再取沉淀物作涂片。

2、检验方法及鉴定

（1）涂片与镜检：脓汁及增菌培养物发现单一革兰阴性杆菌，可初步报告，染色、形态、性状供临床用药参考。

（2）分离培养：粪便标本可用弱选择鉴别培养基进行分离，脓汁等可用血平板分离，取可疑菌落进行形态观察及生化反应。

（3）鉴定：

1）初步鉴定：根据菌落特征，涂片染色的菌形及染色反应，取纯培养物作生化反应。

凡符合KIA（克氏双糖）：A/A或K/A（A是产酸，K是产碱），产气或不产气，H2S（阴性），尿素（MIU）：动力+或-、吲哚+、脲酶-，甲基红+，硝酸盐还原+，VP-，氧化酶-，枸橼酸盐-，可鉴定为大肠埃细菌。

2）最后鉴定：一般常规检验做到上述初步鉴定即可，必要时可做系列生化反应最后鉴定。其中主要的鉴定试验为：氧化酶阴性、发酵葡萄糖产酸产气或只产酸、发酵乳糖产酸产气或迟缓发酵产酸、不发酵肌醇、IMViC反应为++——、脲酶阴性、H2S阴性、苯丙氨酸脱氢酶阴性、硝酸盐还原阳性、动力多数阳性。

3）某些大肠埃细菌，尤其是无动力的不发酵乳糖株，应与志贺菌相鉴别，两者的主要鉴别试验可用醋酸钠和葡萄糖铵利用试验及粘质酸盐产酸三种试验。大肠埃希菌均为阳性，而志贺菌均为阴性。

肠道外感染，经涂片染色，分离培养后，生化鉴定到种；由于大肠埃希菌是超广谱β-内酰胺酶的主要产酶株，该酶由质粒介导。应对β-内酰胺酶产菌株进行确定，根据药敏试验结果选用有活性的抗生素进行治疗。

4）血清学鉴定：

ETEC（肠毒素型大肠杆菌）血清学鉴定

EPEC（肠致病型大肠杆菌）血清学鉴定

EIEC（肠侵袭型大肠杆菌）血清学鉴定

EHEC（肠出血型大肠杆菌）血清学鉴定

EAEC（肠凝聚型大肠杆菌）血清学鉴定