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  • [生物化学]双脱氧末端终止法测序体系与PCR反应体系的主要区...

    作者:pooson    文章来源:医学教育网    点击数:    更新时间:2010/3/6
    原题:
    [生物化学]双脱氧末端终止法测序体系与PCR反应体系的主要区别是前者含有:?
    选项:
    A.模板
    B.引物
    C.DNA聚合酶
    D.ddNTP
    E.缓冲液

    答案:
    D
    解析:

    答复:本题选D。

    一、双脱氧末端终止法测序体系

      用一侧引物对PCR产物进行双脱氧末端终止法测序反应,用一个ddNTP参入反应,产生长短不一的单链DNA ,然后进行SSCP分析。可分别使用两侧的PCR引物,获得一端平齐的长度不等的DNA单链。DDF方法克服了SSCP分析时因DNA长度影响SSCP显示的困难,通过一种双脱氧核苷酸产生异质性的单链DNA,使其中长度合适的DNA片段显示SSCP改变。

    二、PCR反应体系

    标准的PCR反应体系:
       10×扩增缓冲液      10ul
       4种dNTP混合物    各200umol/L
       引物           各10~100pmol 
       模板DNA       0.1~2ug 
        Taq DNA聚合酶    2.5u 
       Mg2+         1.5mmol/L
       加双或三蒸水至     100ul
    PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

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